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Immunetics DK-B502-032說明書

更新時間:2019-08-08      點擊次數:1825

Immunetics DK-B502-032說明書

Bactx®血小板細菌檢測試劑盒
產品目錄號:DK-B502-032
32個測試
預期用途:
用于檢測血小板中細菌的Immunetics®Bactx®細菌檢測試劑盒是一種快速、定性比色法,用于檢測高達六(6)單位白細胞池中的需氧和厭氧革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌。
輸血后四(4)小時內匯集的全血源性血小板(血小板減少,白細胞減少)減少作為質量控制試驗。
簡介:
細菌是血小板單位中常見的污染傳染源。據估計,單采血小板捐獻的細菌污染率為1/5000,使血小板成為輸血相關感染的常見來源。

. 因為血小板必須儲存在20-24
為了維持功能,少量的細菌
大部分是從捐獻者的皮膚中引入血小板,在幾天內可以增加到非常高的數量。

. 皮膚菌群
并不是污染血小板單位的僅有的細菌來源;許多革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌的菌株已在被污染的血小板單位中被鑒定出來,包括葡萄球菌、假單胞菌、芽孢桿菌和鏈球菌。

. 為了提高輸血安全性,AABB于2004年3月發布了指令5.1.5.1,要求血庫和輸血服務機構對所有血小板單位實施細菌檢測方法。

. 隨著AABB臨時指令5.1.5.1.1的實施,進一步的保障措施于2011年1月生效,該指令規定,此類細菌檢測方法必須在FDA批準之前進行,或必須證明對FDA批準的方法具有同等的敏感性。

.
Bactx®試劑盒是一種定性比色分析法,通過識別肽聚糖(細菌細胞壁中普遍存在的成分)檢測血小板樣品中的細菌。該試劑盒由凍干肽聚糖檢測試劑、樣品制備試劑、對照品和微膠管組成。在肽聚糖存在下,該分析產生紅色。
表明血小板樣本中存在細菌的產品。用光度計對反應產物進行檢測,并用基于PC的軟件對結果進行自動解釋。原理:Bactx®檢測檢測白細胞減少全血源性血小板(LR WBDPS)池中的細菌。Bactx®檢測可識別革蘭氏陽性、革蘭氏陰性、需氧和厭氧細菌。本試驗檢測是否存在肽聚糖(pg),肽聚糖是革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌中細菌細胞壁的組成部分。
為了測試匯集的血小板是否存在細菌性PG,從血小板袋中進行小體積血小板(0.5 ml)的空間取樣,并將其添加到含有1 ml溶解試劑的微膠管中,并通過倒置進行混合。將微膠管短暫離心成不溶性血小板碎片和細菌細胞壁碎片(如果存在)。然后將顆粒均勻化。
在0.5毫升的提取試劑中,用移液管上下移動10次。堿性提取試劑能有效地從細菌細胞壁釋放PG,達到良檢測效果。后,將0.5毫升的懸浮液加入含有0.5毫升中和試劑的清潔的微濾管中,倒置混合。
從所得樣品中,將0.3 ml添加到含有凍干檢測試劑的試管中,將試管旋轉3秒鐘,然后將試管放入Bactx®閱讀器中。Bactx®讀卡器是一種光度計,可自動監測檢測反應,并使用安裝在所提供筆記本電腦上的軟件解釋結果。如果在
在30分鐘的讀取時間內,將生成一個“失敗”結果并伴有聲音警報;否則,將記錄一個“通過”結果。
Bactx®套件和相關協議包含在美國專有技術7598054和其他未決專有技術中。

 

供應材料:
1。Bactx®反應管(零件號:CB-B005-032)。32個密封玻璃管,每個管含有用于1次試驗的凍干檢測試劑。
2。溶解試劑(部分CC-L001-060)。含有*、表面活性劑和正丁醇的水溶液,1 x 60毫升。
三。提取試劑(零件號CC-E001-060)。*水溶液,1 x 60 ml。
4。中和試劑(零件號CC-N001-060)。4加入慶大霉素的嗎啉丙烷磺酸鹽(MOPS)溶液
作為防腐劑,1 x 60 ml。
5。陽性對照(部分CB-P012-000)。從懸浮在MOPS緩沖液中的枯草芽孢桿菌提取純化肽聚糖,添加慶大霉素作為防腐劑,1 x 1.8 ml。
6。陰性對照(部分CB-N031-000)。添加慶大霉素作為防腐劑的MOPS緩沖液,1 x 1.8 ml。
7。無菌2毫升微型離心管(微型離心管)(零件號AA-T029-000),數量50。
8。無菌1.5毫升微型離心管(零件號AA-T032-000),數量50。

 

所需但未提供的設備:
1。臺式微型離心機(可旋轉14000–20000 x g)(示例包括Eppendorf 5418和5424型、Beckman Coulter Microfluge 18和Thermo Scientific Sorvall Legend Micro 21)。
2。用于1.5–2毫升微型膠管的機架。
三。旋渦練習。第2頁共13頁生效日期:2012年6月8日CF-B502-704
4。校準單通道1000L微量移液器。
5。無菌一次性1000L移液管(宜帶過濾器)。
6。清潔的一次性液體廢物容器(例如50毫升錐形管或無菌樣品杯)。
7。帶蓋子的無菌容器,用于在制備樣品(微濾片或離心管)之前接收初始血小板樣品。
8。無菌取樣裝置或脫管器、封管器、干凈的刀口(剪刀、手術刀或分段取樣裝置)。
一次性使用酒備墊。
9。BACTX
畗讀卡器(非調音部分BTX-001)。
10。筆記本電腦,配備Bactx®分析軟件(非調節劑部分AA-C018-000)。
11。個人防護設備(包括安全眼鏡)。
12。用于清潔BACTX上管槽的罐裝壓縮空氣
必要時讀取。有關指南,請參閱Bactx Reader®用戶手冊(Immunitics Doc GN-U0001)。
13。必要時,清潔塑料鑷子,以清除管槽中的碎屑。有關指南,請參閱Bactx Reader®用戶手冊(Immunitics Doc GN-U0001)。

 

警告:
1。用于體外診斷。
2。處理工具箱組件時,應始終使用丁月青手套(盡量不要使用粉末)。不應戴乳膠手套,因為乳膠微粒可能導致錯誤的結果。
三。為了使試驗達到適宜、可重復和準確的性能,技術人員應接受有關程序的培訓,并且必須遵守本說明書中的所有說明。偏離指示可能導致錯誤結果。
4。在bactx®分析中使用的所有樣品和材料應在生物危害廢物容器中處理。按照OSHA血源性病原體標準(29 CFR 1910-1930)處理所有含血小板的溶液。
5。在進行分析時,穿戴適當的個人防護裝備,包括安全眼鏡。
6。使用后要蓋緊瓶蓋,避免污染。
7。所有步驟的室溫應在19-26°C之間。
8。在分析過程中保持Bactx®讀卡器蓋打開。在分析過程中,不要從Bactx®讀卡器中取出試管。
9。不要使用過期的試劑。一旦打開,Bactx®細菌檢測試劑盒可使用21天。
10。BACTX®反應管含有人血清白蛋白。沒有已知的檢測方法能夠*保證從人類來源獲得的產品不會傳播感染。因此,所有人工來源的材料都應被視為具有潛在傳染性。建議使用BACTX
反應管的處理應符合OSHA關于血源性病原體的標準,并采取普遍預防措施。
6在BACTX®反應管中含有的人血清白蛋白在FDA批準的中心被發現對人類免疫缺陷病毒1型和2型(HIV1/HIV-2)、HIV-1抗原(HIV-1 Ag)、丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗體無反應性。
11。陽性對照品含有來源于滅活微生物的成分。沒有一種已知的檢測方法能夠*保證從滅活微生物中獲得的產品不會傳播感染。生物安全2級或其他適當的生物安全做法應用于含有或懷疑含有傳染源的材料。
12。Bactx®細菌檢測試劑盒的性能特點是使用混合的、白細胞減少的全血衍生血小板和CP2D抗凝劑。
13。用戶應根據科學合理的取樣方法驗證Bactx®分析系統。
限制:
1。合并白細胞減少的全血源性血小板樣本應在從池中取出后2小時內進行檢測。
2。推薦的72小時宜采樣時間僅基于8種需氧生物的檢測。在檢測研究中,被測厭氧生物沒有生長。查閱性能章節
特性,見下文。
三。待測血小板應在采集后8小時內制備,并懸浮于血漿中。
4。為了獲得適宜性能,白細胞減少應在處理(預儲存)時進行。在Bactx®之前進行后續過濾的池
取樣可將白細胞減少血小板池中的細菌負荷降低到低于Bactx®檢測限的水平。

試劑注意事項:
根據OSHA 29 CFU 1910.1200和適用的歐洲共同體(EC)指令對試劑進行分類。
適用的分類、風險(R)和安全(S)術語如下所示。如有要求,可提供材料安全數據表。

儲存和穩定性:
•將Bactx®反應管、萃取劑、對照品和中和劑儲存在2–8°C。
•在2–26°C下儲存分析試劑和微膠管。
•在試劑盒標簽上注明失效日期之前,使用Bactx®反應管、溶解試劑、提取試劑、陽性對照品、陰性對照品和中和試劑。一旦打開,Bactx®細菌檢測試劑盒可使用21天。
推薦技術:
正確清潔工作區域:
只要使用仔細的實驗室技術,并定期進行清潔,以防止污染物進入試驗試劑中,就可以在工作臺上進行該試驗:
•清潔表面,用消毒劑(70%酒精噴霧或類似物)和干凈的紙巾進行日常試驗,作為良好的實驗室做法。理想情況下,在進行每項試驗之前,應進行消毒。
•應定期清潔樣品制備所需的微量移液器、微型管架、渦流器和離心機,以避免樣品受到污染。
•工作區應為無通風區,行人流量低。
正確處理樣品:
•搬運工具箱組件時,應始終使用丁月青手套(盡量不含粉末)。不應戴乳膠手套,因為乳膠微粒可能導致錯誤的結果。
•避免接觸管和蓋的頂部,因為這可能會引入污染物。
•應經常更換手套,以避免樣品受到污染。
•保持所有管道關閉,必要時僅短暫打開。這將防止空氣或其他表面的污染。
•在樣品制備過程中,僅使用隨Bactx®試劑盒提供的1.5 ml和2.0 ml微膠管。
樣品類型:
1。為了獲得宜性能,從收集LR-WBDP池中新單元后72小時到第5天結束時存儲舊單元的池中抽取樣本。
2。血小板應從儲存在20-24℃平臺振動篩上的裝置中取樣。

 

樣品采集:
對于要測試的每個血小板池:
1。在無菌收集管(微型膠卷或帶帽離心管)上用細尖長久性墨水實驗室標記筆寫下池ID。
2。確認收集管上的ID與池上的ID相同。
三。使用以下兩種方法之一將至少0.5 ml血小板轉移到無菌收集管中:
•要使用經批準的無菌連接設備,請參閱設備制造商的說明。第4頁共13頁生效日期:2012年6月8日CF-B502-704
•從新創建的段中取樣:
a.使用管剝離裝置將段中存在的血小板表達回血小板單元。
b.在不釋放剝離裝置的情況下,將血小板單元翻轉幾次。
c.松開剝離裝置,讓血小板流入空段。
d.使用管道密封裝置密封長度為4–6”的管段(遵循制造商關于正確使用管道密封裝置的說明)。
e.分離管段。
f.將血小板轉移到無菌收集管中:
F1。用無菌酒備墊清潔管段的一端。
F2。將段的干凈端直接放在樣本收集容器上。
F3。用干凈的刀口(剪刀、手術刀或切片取樣裝置)切開切片末端,并將血小板排入收集管。
F4。為了增加血小板在節段中的流速,從封閉端擠壓節段并將樣品推向開口或切開節段的封閉端。
F5。將蓋子放在收集管上。
F6。廢棄空的段和段取樣裝置(如果使用)作為生物危險廢物。
F7。用無菌酒備墊清潔剪刀或手術刀。
4。收集的血小板樣本應在從血小板單元取出后2小時內進行處理。
5。重復步驟1-4,多八(8)個血小板池。

試驗程序:
開始測試前執行以下步驟:
•從冰箱中取出Bactx®反應管、裂解試劑、萃取試劑和中和試劑。使用前,將這些試劑保持在室溫(19–26°C)下45分鐘。
•按照Bactx®讀卡器用戶手冊(文件GN-U0001)中提供的說明打開Bactx®讀卡器并打開Bactx®分析軟件程序。在Bactx®程序窗口中,所有八個頻道都應顯示“準備就緒”。應將技術人員的ID(2-40個字符)輸入到Bactx®軟件窗口頂部的“Technician ID”字段中。
控制:
控制應每班運行一次,或根據實驗室的質量控制政策。每次校準Bactx®讀卡器后也應運行控制裝置。此校準程序在BACTX中描述
讀者手冊(文件GN-U0001)。每個實驗室負責使用BACTX®控制來確定可接受的質量。
在特定實驗室環境和使用條件下監測試驗性能的保證計劃。控制溶液直接添加到Bactx®反應管中。陽性對照品在使用前必須*旋轉,以*重新懸浮肽聚糖溶液。
1。要運行控制,首先以大速度旋轉正控制管4次,持續30秒。負控制管在使用前只需要脈沖渦流。
2。使用一個精細的長久性實驗室標記,通過在Bactx®反應管標簽上打印的“ID”空白上書寫,將兩個Bactx®反應管為正和負。
三。通過將脫蓋器的帶刺端插入蓋的內唇下,從每個BACTX®反應管上拆下綠色蓋。輕輕地轉動去蓋器以拆下蓋。將綠色蓋棄置在適當的廢物容器中。
4。使用校準的單通道1000L微量移液器,將0.3ml陽性和陰性對照品轉移到相應的Bactx®反應管中。
5。以大速度旋轉每個Bactx®反應管3秒鐘以混合。
6。立即將Bactx®反應管放入Bactx®讀卡器。確保反應管的底部與Bactx®讀卡器中的井底部接觸。更換BACTX®讀卡器的蓋子。
7。在筆記本電腦上的Bactx®分析窗口中,單擊“Start all samples”(開始所有樣本)按鈕。測試將運行30分鐘。按照Bactx®讀卡器用戶手冊中的說明保存分析結果。
8。在30分鐘分析結束時,Bactx®分析軟件應報告陰性對照管“通過”和陽性對照管“失敗”的結果。如果控制結果不符合質量保證驗收標準,請聯系非協調人。在沒有令人滿意的控制性能的情況下,不要開始血小板池測試。

Bactx®樣品的制備:
標記微膠管和Bactx®反應管:
本節介紹了微膠管和反應管的正確標簽,以盡量減少樣品混淆和誤認的風險。圖1說明了標記過程的一個示例。
1。將血小板樣本(來自上面的“樣本采集”部分)放在一排微型膠管架中。
2。將2毫升微膠管放在血小板樣品上方一排,每個血小板樣品用1支2毫升微膠管。使用細尖長久性墨水實驗室標記,在其下的血小板樣品上用相同的池ID標記每個2毫升的微膠管。確認2毫升微膠管上的ID與血小板樣品相同。如果ID不正確,請丟棄2毫升微型膠管,并貼上新的2毫升微型膠管標簽。僅使用隨Bactx®套件提供的2毫升微型膠管。
三。將1.5 ml微膠管放在2 ml微膠管上方的一排,每個血小板樣品用1.5 ml微膠管。使用細尖長久性墨水實驗室標記器,在其正下方的2毫升縮微膠管上用相同的ID標記每個1.5毫升縮微膠管。確認1.5毫升微型膠管上的ID與下面的2毫升微型膠管相同。如果ID不正確,請丟棄1.5毫升的微粉管,并貼上新的1.5毫升微粉管標簽。僅使用隨Bactx®套件提供的1.5毫升微型膠管。
4。將Bactx®反應管放在1.5 ml微膠管上方的一排,每個血小板樣品有一個反應管。在每個Bactx®反應管標簽上打印的樣品ID空間中,使用細尖長久墨水實驗室標記在每個Bactx反應管上寫入與其下方1.5 ml微膠管上相同的ID。

準備Bactx®樣品:
1。使用單通道1000L微量移液器,將1.0 ml的溶解試劑移到每個空的2 ml微型移液管中。加入溶解試劑后,關閉各管上的蓋子。
2。用單通道1000L微量移液器,將0.5 ml中和試劑移液到每個空的1.5 ml微型移液管中。加入中和劑后,關閉各管上的蓋子。
三。從機架中左邊位置的血小板樣品(圖1中的示例中的p1)開始,使用微量移液器將0.5 ml血小板轉移到直接在其上方含有溶解試劑的2 ml微膠管中。
立即蓋上2毫升微膠管上的蓋子,將管倒置3次混合,然后將2毫升微膠管放回機架中的原始位置。確認血小板僅從位于
在2毫升微型膠管的正下方。不要丟棄血小板樣品。對剩余的血小板樣本重復此步驟,從左到右進行操作。
4。在14000–20000xg下對2 ml微粉管進行離心3分鐘。一旦離心結束,小心地將2 ml微粉管放回管架,確保將管放置在與之前*相同的位置。
確認2毫升微膠管的ID與血小板樣本上的ID匹配。

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5。打開機架左邊位置的2毫升試管(圖1中示例中的p1),將試管倒置3秒鐘,將上清液倒入廢物容器中。清除剩余液滴
將倒置的試管輕敲在廢物容器的邊緣,或將倒置的試管輕敲在干凈、干燥的實驗室紙巾或紙巾上。關閉管上的蓋。檢查管子,確認
白色膠狀顆粒仍然存在。如果顆粒丟失,必須使用另一個0.5毫升血小板制備新樣品。將2毫升試管放回機架中的位置。對剩余的2毫升微膠管重復此步驟,
從左到右工作。
6。使用微量移液器和干凈的無菌移液管將0.5 ml提取試劑轉移到機架左邊位置的2 ml微膠管中(圖1中的示例中的p1)。一只手握住2毫升的微粉管,將移液器設置為0.5毫升,上下移液10次,使移液器活塞回到初始位置,然后*壓下活塞。這項技術將確保整個體積通過移液管。為避免產生過多的泡沫,上下吸液時,吸液管的開口應始終靠近微膠管的底部。將2毫升微型膠管放回機架中的原始位置。

 

7。驗證1.5 ml微膠管的ID是否與管架上同一列中2 ml微膠管、血小板樣品和反應管上的ID匹配。
8。應在Bactx®分析中立即測試樣品。
執行Bactx®分析:
1。從Bactx®反應管左邊的位置(圖1中的示例中的p1)開始,通過將脫蓋器的帶刺端插入到蓋的內唇下,從Bactx®反應管上拆下綠色蓋。輕輕地轉動去蓋器以拆下蓋。將綠蓋棄置在適當的廢物容器中。返回bactx®
反應管在機架中的原始位置。對其余的Bactx®反應管從左到右重復此步驟。
2。驗證Bactx®反應管的ID是否與位于其正下方一行的1.5 ml微膠管上的ID匹配。
三。從左邊位置的1.5 ml微膠管(圖1中的示例中的p1)開始,使用干凈的無菌移液管將0.3 ml從1.5 ml微膠管直接轉移到位置的Bactx®反應管中。
在上面。對剩余的1.5 ml微粉和Bactx反應管從左到右重復此步驟。
4。以大速度旋轉每個Bactx®反應管3秒鐘,以混合并將每個Bactx®反應管返回機架中的原始位置。驗證Bactx®反應管上的ID是否與位于其正下方一行的1.5 ml微膠管上的ID匹配。
5。將位于管架左邊位置的Bactx®反應管放入Bactx®讀卡器的管槽1中。確保反應管底部接觸到Bactx®讀卡器的管槽底部。在bactx的sample id字段1中輸入血小板池id。
軟件窗口。驗證輸入到“樣本ID”字段中的樣本ID是否與管架上同一列中1.5 ml、2 ml和血小板樣本管上的ID匹配。對其余的反應管從左到右重復此步驟。
6。應將技術人員的ID(2-40個字符)輸入到Bactx®軟件窗口頂部的“Technician ID”字段中。將所有反應管放入Bactx®閱讀器后,單擊“Start all samples”(開始所有樣品)按鈕。測試將運行30分鐘。按照bactx®讀卡器用戶手冊中的說明保存bactx®分析結果。遵循機構處理數據文件的指南。

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